HEPES緩沖對作為mRNA原液buffer的原因解析

2016年BioNTech發表LPX-mRNA制劑的文章中mRNA原液中所采用的buffer為HEPES。該研究中使用HEPES緩沖液配置1mg/ml的RNA原液，用于進一步制備RNA-LPX。

HEPES作為IVT反應體系buffer具有優勢，這是我們結合相關文獻，推斷BioNTech采用HEPES緩沖對作為mRNA原液buffer的原因。

三、HEPES相較于其他緩沖體系較為突出的特點

1、pKa隨溫度變化非常小，buffer的pH值隨溫度漂移很小。

2、性質穩定，HEPES不會與其他離子發生相互作用，一方面HEPES不會與其他離子發生絡合影響其他離子功能，另外一方面其他離子的存在不會影響HEPES的緩沖能力。

3、細胞培養基中pH的維持主要依靠培養基中的碳酸氫鹽和5%的CO2共同維持，當細胞處于開放環境時，CO2逸散會導致pH快速上升脫離生理pH范圍，而添加HEPES緩沖對的培養基則不存在這方面問題。

4、HEPES不易穿過生物膜，不干擾細胞內的生化反應。

四、使用HEPES緩沖體系時的注意事項

1、由于哌嗪基團的存在，當HEPES暴露于光線中時，會產生H2O2，這對培養的細胞或其它有生物活性的物體產生毒性，同時對氧化還原敏感的物質不宜共同使用，因此HEPES作為緩沖液的操作應盡量在避光條件下進行。

2、HEPES在生化領域常見的使用濃度為10-25mM，當濃度低于10mM時緩沖能力較弱，不能起到較好的緩沖效果，當濃度較高時對一些細胞可能具有毒害作用。

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